植物バイオテクノロジー

平成19年度は農業科目「植物バイオテクノロジー」を行いました。その授業実践をここに報告します。

■pHで色水作り■

9月12日
今日の朝の大雨は驚きました。道路は冠水して川になっていました。
電車も止まっていました。そんなわけで始業時間は30分遅れの短縮40分授業でした。50分あるものだというつもりで授業の準備をしているだけに短縮は辛いですね。
さて、今日はバイテクと圃場での栽培の違いの話しから始めました。
（圃場での栽培でもバイオテクノロジーは使いますが、ここでは狭義のインビトロ=実験室内をさすこととします。）　室内　と　屋外　の違い
　環境をコントロールできるかどうか
　　光や温度の調節　
　　生育成分の調節
　　無菌かどうか
今日はこの生育成分の調節の中で欠かせないｐＨの調整ということでｐＨとは何かをやっていこう。
ｐＨは水素イオン濃度を水素イオン指数と呼ばれるもので示したもの。
なぜ指数と呼ばれるもので示すか。
その前に濃度について考えなくてはいけないが、モル濃度の話も大事だがこの話は化学でやることとして、ここではｐＨというものはどういうものかを実験を通じて感じてもらおう。
薄い水溶液（希釈水溶液）では、ｐＨは０から１４まである
７が中間でそれより小さいほど酸性が強く、７より大きいほどアルカリ性が強い。
これはどのように強いのか。
ここにｐＨ１の塩酸を持ってきた（０．１Ｎ塩酸）
これを試験管に１０ｍｌ入れる。
ここで各班に2本の駒込ピペットを用意した。
今日マスターするのは、このピペットの使い方
そして、共洗いの仕方。
濃いものを薄める方法
ピペットを区別して使うという考え方
ということで
ｐＨ１の塩酸から１ｍｌとって別の試験管にいれ、そこに蒸留水９ｍｌをいれてｐＨ２の溶液を作る。
これを6回繰り返して
ｐＨ３
ｐＨ４
ｐＨ５
ｐＨ６
そしてかなりｐＨ７に近い液
を作りました。
同様にｐＨ１３の水酸化ナトリウム水溶液（０．１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液）をうすめて
ｐＨ１２
ｐＨ１１
ｐＨ１０
ｐＨ９
ｐＨ８
を作りました。
　これを　水素イオン濃度　と　水酸化物イオン濃度の表でまとめる。
さて、無色の液でどれがどれだかわからないがここでｐＨを調べるものを使う。これに使うのがムラサキキャベツ色素 ということでムラサキキャベツを細かくしてエタノールをいれてもんで色素を出す。
そして、各試験管に２ｍｌずついれ、色を調べ、表でまとめるということで
ｐＨというのは１違うと濃度が10倍違うということ
ｐＨ７のときに水素イオン濃度と水酸化物イオン濃度が同じになるつまり中性になるということ
などをまとめて終わりにしました。
　

■カタラーゼの実験■

9月19日
植物バイオテクノロジーの授業ですが、材料に動物を使っています。
前回、ｐHの授業をしました。なぜ、ｐHが大事かというと生体内の反応はｐHによって変化する。
ということで、生物実験ではおなじみのカタラーゼの実験をしました。
まず、オキシドールは分解されると酸素と水になる。
その反応を早くする物質・・・触媒
　触媒の条件・・・化学反応を起こすときの山（活性化エネルギー)を低くする
　　　　　　　　　　少量でいい
　　　　　　　　　　反応前後で変化しない。
今回は生徒実験を通しながら授業を進めていきました。
まず、オキシドールと二酸化マンガンの反応で線香で酸素発生を確認する。
つづいて、鳥レバーとオキシドールで同様に行う。
はじめを無機触媒、後者を酵素
　この酵素をカタラーゼといい、どんな生物でも持っている。
　何故もっているか？それは、日曜日の所さんの目がテンを見た人はわかると思う。
　テーマが老化だったが、老化を起こす原因が呼吸をすること
　呼吸をするとどうしても過酸化水素のような活性酸素ができる。
　それが老化を引き起こす。だからカタラーゼでなくそうとする。
そのカタラーゼと無機触媒との違いを見てみよう！
まずは、これ、ｐHによる変化ということで１N塩酸２ｍｌにつけたレバーと１N 塩酸２ｍｌにつけた二酸化マンガン
つぎに１N　水酸化ナトリウム水溶液２ｍｌにつけたレバーと同濃度につけた二酸化マンガン
この実験でカタラーゼの反応はｐHが代わると起こりにくい（完全に起こらないわけではなかった。）
無機触媒は関係が無い
次に温度による変化
氷水につけたものとお湯の中につけたもの。
化学変化は高温ほど早くなる
しかし、酵素は高ければよいわけではない
（この実験では温度調節ができなかったので詳しくできませんでした）
次に煮詰めたレバーと煮詰めた二酸化マンガン
この順番で進めました。
この実験のあと、すべての結果をまとめて
酵素の性質　最適ｐHをもつ
　　　　　　　　基質特異性をもつ
　そして高温では性質を失う
　これらの性質はすべてタンパク質でできているから。
この酵素反応が生体内の反応で重要であるため、温度とｐHというものがかなり重要である。
（これで2時間の内容です）
実験には必ずブランク（対照）をおくということを生徒に意識させるように準備しました
がブランクの説明まで出来ませんでした。
なぜ、レバーにしたか。
　今まで多くの野菜でやってきたが、野菜よりも一番、カタラーゼの反応が安定して得られる。
　ただし、においがきついので１９９９年度やって以来、いままで、普通高校ではやっていませんでした。
　レバーは解毒作用が大きいという話もできる
　時間があったら心臓の解剖をしたかった。（２心房２心室）
　冷凍保存をすれば、次回も使える。

■ホタライトを使った酵素反応■

9月26日
　生物の方では酵素反応が生物２にいき、化学でも化学２を選択しなければ酵素反応にお目にかかれない今日この頃。
　私のお気に入りの実験です。

途中、ウミホタルの話もしました。盛りだくさんの内容です。
今日の植物バイオテクノロジーは、まず最初に先週の実験の後片付け後の試験管ということで、
　前回は肝臓を使った。
　水で流しただけでは落ちない。
　食器を洗うときは何を使う？
　　実験で怖いのは、器具が汚れていることで雑菌など　予期せぬものが混ざる、コンタミと呼ばれるもの
　ということで試験管の洗い方の話をしました。
　コンタミをしたまま実験をし、バイテクでは結果が出るのに時間がかかる。せっかく操作は出来ているのにコンタミでだめになってしまったらどうしようもない。
雑菌とかのコンタミがあるかどうかを調べる方法
　培養してコロニーと呼ばれるものを作って数えるのが一般的しかし、これには時間がかかる。
そこで早く、簡単に行なえる方法が開発された。
それは　キッコーマンが開発したホタルの発光現象を利用したものだ。
これはどういうことか。
生物がコンタミしているならば、そこにはＡＴＰと呼ばれる物質が必ずありそれに反応して発光する仕組みだ。
ということでＡＴＰとは何か。
「歌う生物学」ＴＢＳブリタニカ
を使って説明しました。
ＡＴＰの分かりやすい模型も使いました。
能動輸送の簡単な説明
　細胞の外側にナトリウムイオンがあるとそれが細胞の中に入り込んでしまう
　細胞はそれを外へ出そうとする。このときにＡＴＰを使う。
この後、キッコーマンが開発したルシフェラーゼはどのようにして作られたのか
の話をしました。
さらにホタルの光の点滅は１/ｆゆらぎで求愛をすること
　他の土地から持ってきたホタルは光るけれど警戒発光であること
　などホタルの話をいろいろしてから実験に入りました。
　素敵な宇宙船地球号2007年8月19日放送より
試験管の中にホタライトＢ液（ルシフェリン＋ATP)2.5ml入れたものを1本配ります。
そしてA液（ホタライト）をしょうゆのたれビン（１ｍｌ）を配り、部屋を暗くして発光することを確認します。
2本目　氷水（7度）にいれる。明かりが消える。手で暖める
明るさが戻る。ということでホタルの光は寒いと光らない。
次に、熱湯（72度）の中に入れる。
しばらくすると明るくなって暗くなる。氷水につけても元に戻らない。
明るくするとゼリー状になる。このことで混合液の物質の構造が変わったことがわかる。
さて、何が変わったのだろうか。
このゼリー状の液を２本作る。
１つめはルシフェラーゼを入れる。
　もしも、ルシフェリン＋ATPの構造が熱湯で変わっていたのならば、
　ルシフェラーゼを入れても変化しないはずである。
　　ここで発光する。ルシフェリン＋ATPは熱で壊れていなかった。
2つ目はルシフェリン＋ATPを入れる。
　ここでルシフェラーゼの構造が変化したのならばここで変化しないはず
　実際　変化しなかった。
ここで、実験結果をまとめる。
１　化学変化は温度によって変わる
２　酵素は高温になると構造が変わる
次にｐHによる変化を見よう。
新しい試験管で最初は0.01Nの水酸化ナトリウム水溶液を入れる。
光が薄くなる。
次に塩酸を入れる。光が戻る。
酸とアルカリは互いに打ち消す働きがある。
そしてこの反応では最適なｐHがある。
後の残りの時間で後片付けをして終了しました。

■ブロッコリーからDNAを取り出す■

10月３日
さて、今日は前回まで酵素についてやってきた。
酵素はタンパク質。
タンパク質がさまざまな働きをすることで生物は活動する。
ではその「タンパク質はどのようにして作られるのだろうか」
これはタンパク質を作る遺伝子による。
タンパク質は分解されると20種類のアミノ酸になるから 20種類のアミノ酸の並び方を遺伝子は決めてくれればいい。
その遺伝子とは何からできているか。これはDNAという物質からできているということがわかった。
今日は、そのDNAについて詳しく見てみよう。
DNAはATGCという4つの塩基からできている。
しかし、4つの塩基でどうやって遺伝子を作るのか。
これを考えるのに、ATGCを音に当てはめて考えたDNA　MUSIC というのを持ってきた。
A　T　G　Cがそれぞれ一つずつの音に対応するとする。
すると　4つの音でしかない。
　パソコンで音を鳴らしてみる。
これだと足らない。そこで　AA　AT　AG　AC
というように二つで組み合わせて音を作ってみよう。
さっきより音が多くなった。16音になる。しかし、20種類にはたりない。
そこで　AAA　AAT　AAG　AAC　AAG
というように3つの組み合わせで音を作ってみよう。
今度は曲らしくなってきた。64音になるんだ。
この3つの組み合わせをコドンという。
さて、DNAがどのような構造をしているのか、今日は模型を作ってみよう。
（ペーパークラフトで模型を作る　所要時間は20分）
作ってわかるようにらせん構造。それも塩基が互いに対になっている。
この対のなり方は相補的な関係といい、AにはT　GにはCと決まっている。
そして、これがらせんになっているということで二重らせん構造という。
（ここで1時間）
続いての時間はブロッコリーを使ったDNAを取り出す実験です。
この実験についてはさまざまな方法がインターネットにありますが私は次の方法を使いました。
まず、ブロッコリーをそのまま凍らせる。
（これは凍らせることにより細胞内の水が凍り破壊させるためらしい）
そして凍ったブロッコリーをキッチンバサミで蕾の部分だけを乳鉢に入れる。
（蕾の部分がDNAが一番多く含まれている）
乳棒ですりつぶす（形が無くなるまで20分ぐらいかかります）
その間に２００ｍｌビーカーにビーカーの目盛りで５０ｍｌの蒸留水を取る。
食塩を5.9g溶かす。約１０％食塩水＝2mol/lの食塩水
食塩水の濃度に付いてはいろいろあります。飽和食塩水を用いているのもありますがあとでエタノールを加えたら食塩が出てしまうのでこれぐらいがいいと思います。
さらに台所用洗剤を1滴入れる。
これをDNA抽出液とします。
しかし、この抽出液では、食塩水に溶けやすいタンパク質も抽出されます。
また、加える洗剤は界面活性剤として細胞膜を破壊する働きを持たせるためだが本当にその働きがあるのかはよく分かりません。
（収率があがるのは確からしい）
そして、この抽出液を乳鉢の中に入れて軽くまぜて10分放置
このときにまぜるとDNAが壊れてしまうらしいです。
この放置している時間を使って器具の洗浄とろ過の準備です。
学校にロウトがなかったので100円ショップの漏斗を使いましたが
このロウトのほうがいいようです。
そして、ろ紙の折り方を説明。
ろ液は試験管に集めることとしました。
10分経ったら、駒込ピペットを使って抽出液の上澄みをろ過すると指導したのですが結構、混濁していてなかなかろ過が出来ません。
そのため、５ｍｌ程度、ろ液が取れたところで終わりにしました。
最後に駒込ピペットを使って冷やしたエタノールを同量注ぐ。
このとき試験管のへきに伝わらせてゆっくりとという指導はしたのですがなぜか真ん中から一気に入れるところが多かった。
（二層に分離させるというのがよく理解できなかったようです。）
しかし、こんなに荒っぽい実験でしたが、レシピ通り、エタノールとろ液の界面に白いもやっとしたものが出てきました。
このもやっとしたものがDNAだよということで後片付けをして終わりにしました。
この実験を通してDNAが取り出せるということに驚いた生徒は多かったです。
しかし、この実験はいんちきですよね。最後の白いもやっとしたものはDNAもあるかもしれないけれど、食塩水に溶けてエタノールには不溶のタンパク質かもしれません。
今回の実験ではタンパク質を除去するという行程がありませんでした。
だから、この白いもやっとしたものを取り出して、タンパク質検出の実験をしたらたぶん陽性だと思います。
ろ過が時間がかかるので、この白いもやっとしたものはなかなか取り出しにくいです。
ろ過を簡便にするためにガーゼを使ったり、ティッシュを使ったりする方法がありますが、それではただ単に有形物を取り除いているだけで本当にろ過なのか疑問です。
教科書的にはトリプシンなどの酵素を使ってタンパク質を分解または加熱変性させて除去というのトリのレバーを使ったときにはあります。植物材料ということでタンパク質の含量は少ないとは思いますがこれはごまかしだなと思いました。
今回の実験のポイント
　DNAを取り出す実験の注意（自分のDNAが入り込まないようにするこれはこの開放系では難しいですね）

■テスト前■

10月10日
来週から中間考査が始まるので今日が考査前、最後の授業になります。
最初にブロッコリーからDNAを取り出す実験のまとめをしました。
（前回できなかったので)
ということで最初の1時間はテスト対策の時間にしました。
今までやってきたことの復習です。
・ｐHの話　ｐH１２の液を100倍に薄めたらｐHはいくつになる？
　とかいう話です。
　もちろん　酸をいくら薄めてもｐH7以上にならない
　アルカリをいくら薄めてもｐH7以下にはならない
　というのも補足です。
・酵素と無機触媒の違い
　カタラーゼの実験の話です。
・酵素の話２（ホタライト）
　ルシフェラーゼとルシフェリン
　基質特異性・最適ｐH・最適温度・失活など
二時間目はDNAの転写と翻訳をやりました。
コンピューターによるCGを講義室のテレビに映すために今回、ダウンスキャンコンバーターを使いました。
画面が小さいのでわかりにくかったようです。
大きいディスプレーが欲しいなぁ・・・プロジェクター　　　　　　　　　　　　　　　　　　とかほしい
その後に転写と翻訳について説明。
転写はDNAの遺伝情報をGならC　CならG　TならAというように読み取ること。このとき、Aに対応するのがUなのがポイントそして読み取ったもの・・・これを伝令RNAという。
これをタンパク質工場（リボソーム)に運び、この暗号に対応する3つの塩基とアミノ酸をもった運搬RNAが結びつく。最後に、この結びついている3つ塩基が切れる。
この説明ではわかりにくいから実際に転写と翻訳をやってみよう
ということで広島県の生物実験CD-ROMにある「たのしめるプリント」を使って「ミヤマクワガタ」を作る。
なかなか転写が理解できなくて作るのに四苦八苦で丸一時間かかりました

■パン酵母を用いた遺伝子組み換え実験■

■パン酵母を用いた遺伝子組換え実験２■

11月7日
先週、酵母菌へのベクター導入、そして最小培地で培養し１週間後、今日は、できた組み換え体のコロニーの計測です。
そのまえにこの実験は難だったのかをもう一度振り返る
まず、最小培地で出てくるというのでなぜ遺伝子組み換えが起きたと分かるか。
酵母菌にもし人の遺伝子を導入したらどうなるか？
そして、この技術はどう応用できるか
というこれも生徒用マニュアルにある課題を考えました。
（約30分）
そして、このあとコロニー数の計測です。
今回の実験は導入の効率が良かったのか？
９７０～１３０００と幅がありましたが多くのコロニーが計測できました（「平均は６０００ぐらいです」）
この実験から続いて、アミラーゼの活性を調べる実験を行うためにデンプン培地に今できた酵母と組み換え前の酵母を一つのデンプン培地で培養して調べる。
という意味がわからないらしく、次のような現象が起こりました。
1つめ
　2枚のデンプン培地にそれぞれを導入、その前を分けて入れようとした。
２つめ
　始めのＹＰＤ培地（導入前の酵母を培養した培地）に導入酵母を入れる、
このようなことは何をしているのか（対照実験という意味がわからなかったのかもしれません）
ＤＮＡ導入に関して対照実験を今回、生徒実験として行ないませんでした。
（予備実験でやったものを生徒に見せるだけにしました。
　最後に生徒の感想です。
パン酵母を用いた遺伝子組み換え実験の感想
・遺伝子の実験は安全かつ理解を忘れずにやりました。
　コロニーを１個１個数えるのが難しかったです。
・すこし危険だったので緊張しました。
・とても面白かった。今後、バイオテクノロジーを導入　している高校でもやって欲しいと思う。
・コロニーが思ったより少なかった。初めて実験をして　失敗するかと思ったがちゃんとできてよかったです。
・思いのほか、実験はうまくいき、とても楽しかった。　これからの実験結果が楽しみである。
・菌を移動させるのが大変だった。
・今回のような実験はとても役に立ったと思います。　遺伝子を使った実験は初めてでとても緊張しました。　これからもこのような実験をしてみたいと思いました。
この実験は操作自体はそんなに難しくはないのです。
ただ、生徒には「無菌操作」「クリーンベンチでの作業の仕方」
など付属しているものが多かったので新鮮だったのではないでしょうか。
普通高校で生物室で行う実験ではどうなのかな？
とおもいます。何週もこのように引っ張る実験に生徒は飽きないか？

■パン酵母を用いた遺伝子組み換え実験３■

11月21日
11月7日に２時限目を行ってから、４日間、２５度で培養し、コロニーが結構大きくなっていました。
その後、５度のインキュベーターで冷蔵して静菌させておいたものを今日使いました。
まずは、今日の話題から
ｉＰＳ細胞の話
　これは今日の読売新聞に載っていた話題
ｉＰＳと板書し、これは何か？
生徒「液晶テレビにあるよね」
そう、一秒間当たりどれだけデータを送れるかとか
液晶ディスプレーの方式にＩＰＳというのがあるが
小文字のｉＰＳというのがポイント
これは日本で京都大学が始めた研究で誘導多機能性幹細胞の略で始まったのが
ＥＳ細胞と同じように万能細胞になったことを今日、アメリカの科学誌「セル」（電子版）に発表した「人工多能性幹細胞」と命名した。
このｉＰＳ細胞のつくりかたが今までやってきた遺伝子組み換えと同じ方法だ。
皮膚の細胞に４つの遺伝子をもったベクターを入れるというもの。
新しい技術ということで関心が高まっている。
ということでこの話題をした後に
アミラーゼの話
　もしアミラーゼが無かったらどうなるだろう？
　　でんぷんが分解できない。
さて、胃腸薬のアミラーゼはどうやって作るか。
　実はこれは、日本人最初のアメリカンドリームで明治時代に高峰譲吉によって　アスペルギルス　オリザというカビから大量生産した。ところでこのカビはどんなカビか？
オリザと名前がつくのがポイント
　１年のときにオリザ　サティバとかやったのを覚えているかな？
オリザはイネだったね。このカビは米と関係がある。
コウジカビだ。
　ということでここで「もやしもん」の話

そして、ここで、遺伝子組み換えによりアミラーゼ活性があるかどうか調べる。
ヨウ素液をかけると
組み換え体の周りが染められないはずだ。
万が一生徒がうまくいかなくでもいいように昨日、培養を仕掛けたものでそれを見せました。
生徒がやったものはどれも染まりません。
そうです。培養が長すぎて、アミラーゼがシャーレ全体に広がってしまったようです。
　染まらないということはアミラーゼ活性があることはわかるがもとの酵母が活性がないということが確かめられませんでした。
最後に実験の後処理について殺菌して処理する説明
薬品による殺菌
・７０％アルコール
・次亜塩素酸ナトリウム水溶液
熱処理
　オートクレーブ
ここで実験した培地類を回収し、オートクレーブにかけ生徒は手を洗って一時間終了
２時間目
５００ｍｌペットボトルにお湯１００ｍｌを入れる。
そしてショ糖５ｇを溶かす。
市販のパン酵母５ｇを入れる。
ふたをする。
５０度の湯浴に入れる
酵母はショ糖を栄養にしてアルコールと二酸化炭素を作る。
パンは二酸化炭素により膨らむ。
このアルコールは酒になる。
ここでその簡単な実験をやってみている。
酵母から盛んに泡が出ているのがわかる。
これが二酸化炭素
本当に二酸化炭素なのか。
二酸化炭素を吸収する水酸化ナトリウムを入れてみるとわかる。
という説明をいろいろしてから、おもむろにパンパンになったペットボトルを取り出し、ふたを開けてすばやく水酸化ナトリウム１０粒をいれ、ふたを閉じるしばらくするとペットボトルがへこむ。（これは演示）
酵母による反応ということで次はこんなのをやってみよう。
(生徒実験）
グルタミン酸ナトリウム（味の素）
メチレンブルー希釈液
１０％酵母液
を使った脱水素酵素の実験です。酵母はいろんな酵素を持っているというのを示す実験でした。
これで
遺伝子組換え・酵素反応のまとめができました。
今回、アミラーゼ活性は培養時間が長くやりすぎるとダメだということがわかりました。
　

■ プロトプラストの観察実験■

11月28日
　この実験キットは　ブルーバックス　「入門　たのしい植物学」（田中修著）を参考に今年度初めて授業の中に取り入れた。
　キットは、酵素液をはじめとしてアスピレーター、コック、瓶などすべてがそろい、植物材料さえあればいつでも取りかかれるようにできており、すぐに活用することができた。
　植物材料に関しても、キットの中のCD-ROMの動画を参考として用いることができ、実験もスムーズに行うことができた。
　この実験は、「植物バイオテクノロジー」の時間の中で次のように実施した。
実施日　　平成19年11月28日　３，４限目
実施生徒　植物バイオテクノロジー　選択履修者　７名
授業の進め方
　準備　この授業を予告し、観察したい植物を各自持参するよう指導した。
　導入　細胞融合技術によって多くの野菜などが作られている
　発展　プロトプラストの作成法と細胞融合技術についての説明
　　　　この実験キットの説明
　この後、実験に取りかかった。
　まず、各自準備してきた植物を用いて切片を作成した。このときの時間がとてもかかり、ここまでで１時間の授業を終えるほどだった。
この後、すべての生徒が酵素液に入れたところで減圧させた。
　アスピレーターの説明とこの実験の意味を説明しながら行った。
　この操作の中で突沸が起きやすく中の試料が飛び出るということが何度かあり、そのたびに中断し、ピンセットを使い試料を戻すということを繰り返した。このことで時間がかかった。
　このあと、恒温湯浴で暖めた。（３０℃～４２．５℃）
　生徒に各自顕微鏡を準備させた。その間、時間を計り、サンプルを３分ずつ振り混ぜた。
　時間が足りなくなり始めたのでお湯の中での反応を２０分とした。
　そして、５分静置している間に、プロトプラストをスライドガラスにとるときの注意を行った。
　５分後、各自、スポイトで吸い取り検鏡した。本校には「パスツールピペット」がなかったのでスポイトで代用した。（スポイトでも十分採取できたが、パスツールピペットの方がよいのだろうか？）
　今の季節、生徒に試料を用意させたところミカンとユズが多く、ほとんどが黄色のサンプルになった。アロエを持ってきた生徒がいたので緑の試料が一つできた。
　生徒が準備するもののほかに教師側で紫キャベツ、キャベツ、ニンジンを用意した。ニンジンは前日に予備実験を行ったところ無色のプロトプラストが得られたが色がないのは味気ないので本実験には用いなかった。
　教師側で演示で実験するときに紫キャベツとキャベツを用いて実験を行った。
ミカンを用いたところ、多くは無色のプロトプラストが得られた。（探せば黄色もあった）
　アロエは緑色のものが得られた。
後片付けの時間を入れるとぎりぎりの時間になってしまったので多くの生徒はこの観察だけで実験を終わりにさせ後片付けをさせた。
一人だけ早くすすんだ生徒がいたので、アロエ、キャベツ、紫キャベツの合わさったプロトプラストにPEGを加えて、実験を続行させた。
そして、この結果を他の生徒が見るという形で授業を終わりにした。
　この実験ではPEGを加えた後、融合が行われるが、乾燥するのも早く完全に一つの細胞にまでなるところまでは観察できなかった。
以上の授業結果からいえること
１　試料を３mmにきるときにはキャベツなど表皮をそのまま使えるものの方が時間がかからない。（柑橘類やアロエでは色素細胞だけとるというのに時間がかかった。）
２　突沸を防ぐ方法を考えながら減圧をしなくてはいけない
３　顕微鏡などの操作技術は身につけていなければこの実験はできない。
４　二種類のプロトプラストを別々に作成すると混合するのに時間がかかり、　　細胞融合までいくのが難しい。
　実験のフローチャートを板書で説明したが、パワーポイントなどで実験の流れを示したものが付属のCD-ROMにあれば操作はしやすかったと思う。
動画もいいが、動画では所々で止めなくてはいけなくて面倒である。
【全体を通しての感想】
　いろいろな問題点はあるが簡便な方法でしかも効率よく安価でプロトプラストが単離でき、しかも細胞融合まで生徒の手でできる本キットをもちいて細胞融合技術の授業を有意義なものにすることができた。
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